嗜酸氧化亞鐵硫桿菌硫同化途徑蛋白ATP硫酸化酶、APS還原酶、半胱氨酸合成酶的研究.pdf

1、本研究首先對生長于不同能源培養基中的嗜酸氧化亞鐵硫桿菌的ATP硫酸化酶，APS還原酶的基因進行反轉錄PCR擴增，結果表明cysD-1基因和cysH基因的表達量均存在差異，說明對生長于不同能源培養基的這兩種酶在轉錄水平上均存在差異。 隨后克隆、表達、純化了ATP硫酸化酶，APS還原酶和半胱氨酸合成酶的基因。根據SDS-PAGE測定蛋白分子量分別為33 kDa，28 kDa，32 kDa。純化的ATP硫酸化酶蛋白溶液呈亮黃色，由紫外

2、可見光譜分析，可知其含有PLP輔助因子。據我們所知，這是首次報道ATP硫酸化酶的亞基帶有亮黃色表明其含有PLP輔基。 純化的APS還原酶為黃褐色的蛋白溶液。由紫外可見光譜及電子順磁共振結果確認鐵硫簇是其蛋白質的活性位點。由序列比對及分子結構模擬，構建了蛋白的突變體C110A，C111S，C193A，C196A，由蛋白顏色、紫外光譜及電子順磁共振結果證明這些位點是鐵硫簇的結合位點?；钚詼y定表明，其能還原APS生成亞硫酸鹽。

3、 純化的半胱氨酸合成酶呈亮黃色，由蛋白顏色及紫外可見光譜可知其含有PLP輔基，熒光分析表明其發生了由色氨酸殘基到內部亞醛胺的外部異構體的能量轉移。定點突變表明K30A，H150A，H168A是PLP的重要結合位點?；钚詼y定表明，硫化物與OAS在半胱氨酸合成酶的作用下生成半胱氨酸。 結合以前的研究，可以證明在嗜酸氧化亞鐵硫桿菌中，存在著以下硫酸鹽的同化途徑：硫酸鹽由ATP硫酸酶催化激活生成APS和PPi，APS又被APS還原酶還原