磷酸化蛋白質分析方法研究及其在人胎肝磷酸化蛋白質組研究中的應用.pdf

1、磷酸化修飾是生物體內最重要的蛋白質翻譯后修飾之一,蛋白質的磷酸化與去磷酸化過程是真核細胞生命活動最普遍的調控手段.對磷酸化蛋白質的檢測和磷酸化位點的確定是認識蛋白質磷酸化在生命活動中調控機制的重要參考信息,用蛋白質組學的策略研究生物體的磷酸化修飾也是功能蛋白質組學的重要研究內容.由于磷酸化蛋白質在生物體內的含量很低,對它的檢測和位點分析一直是個艱難的工作,而磷酸化蛋白質的規?；治龊臀稽c鑒定更是磷酸化蛋白質組研究面臨的技術挑戰.該論文的

2、工作包括基于親和提取和生物質譜的磷酸化蛋白質分析方法的建立,以及規?；姿峄鞍踪|分析技術在人胎肝磷酸化蛋白質組研究中的應用.論文第一章以標準磷酸化蛋白質為樣本建立了蛋白質磷酸化修飾分析技術體系:以固相金屬親和色譜為基礎的磷酸肽親和富集技術幫助從復雜的肽混合物中篩選磷酸肽候選物;MALDI-TOF質譜圖中的磷酸肽亞穩離子峰輔助判斷絲/蘇氨酸磷酸化類型;對磷酸肽候選物進行磷酸酶水解實驗結合質譜分析可以直接證明磷酸肽的存在;最后用串聯質譜分

3、析結合數據庫檢索鑒定用來確定磷酸化位點.論文第二章搭建了全程自動化的固相金屬親和色譜-反相液相色譜-串聯質譜磷酸化蛋白質分析平臺,程序控制,方便快捷,便于根據不同樣本改變實驗條件,優化分析參數.用標準磷酸肽考察了系統的性能,優化了分析參數并應用于重組人TRF1的體外磷酸化位點的鑒定,鑒定出2個磷酸化位點,為該蛋白質的激酶磷酸化修飾研究提供了有用的信息.論文第三章利用所建立的磷酸化蛋白質分析方法規?；治隽巳颂ジ渭毎ぬ崛〉鞍踪|中的磷酸化