雜環胺酶聯免疫檢測方法的研究.pdf

1、本實驗首次建立了針對食品加工過程中產生的有害物質雜環胺的酶聯免疫檢測方法，并將其應用于實際樣品中。
　　選取了一種結構相對簡單、有代表性的的雜環胺IQ（2-氨基-3-甲基咪唑并[4，5-f]喹啉）作為待測物來建立雜環胺的酶聯免疫方法。為了降低成本，實驗選擇一種與IQ結構類似物PQ（1H-吡咯[2，3-f喹啉）替代IQ合成半抗原。采用活化酯法將半抗原與BSA偶聯制備免疫原，成功制備多克隆抗體，與雞卵白蛋白OVA偶聯制備包被原，與辣根

2、過氧化酶HRP偶聯制備酶標抗原。經過優化確定間接競爭ELISA的最佳工作條件為:包被原包被量0.05μg/孔，抗體稀釋倍數3500倍，酶標二抗稀釋倍數為20000倍，標準品10 mg L-1，5倍梯度稀釋，封閉液為0.5％脫脂乳粉/PBS，PBS緩沖液的pH為7.4，孵育溫度37℃C，顯色25 min左右，方法的靈敏度(IC50)和檢出限(IC15)分別為71±3μg L-1和3±0.5μg L-1。經過優化確定直接競爭ELISA的最佳

3、工作條件為:抗體包被量為0.5μg/孔、酶標稀釋倍數為2000倍，封閉液選用0.5％脫脂乳粉/PBS，PBS緩沖液的pH為7.4，方法的靈敏度(IC50)為50±3μg L-1，檢測限(IC15)為3±0.3μg L-1。用直接競爭ELISA法測定IQ與MeIQ、MelQx、DiMelQx、PhIP、DMIP、AαC的交叉反應率，除與MelQ有交叉反應率為12％外，與其他種雜環胺沒有交叉，說明該實驗制備的抗體具有較好的特異性。
　

4、　選擇魚肉松、豬肉、牛肉為樣品進行添加回收實驗，分別添加了20μg kg-1，50μg kg-1，150μg kg-1，400μg kg-1四個濃度，得出魚肉松的添加回收為84.96％-116.23％，豬肉的添加回收為89.79％-107.34％，牛肉的添加回收為89.76％-101.44％，變異系數均小于20％。所建立的直接競爭酶聯免疫檢測方法具有很好的準確性和精密度。使用高效液相色譜法驗證本實驗建立的直接競爭酶聯免疫方法，兩種方法檢