黃曲霉毒素B1在基于DNA修飾金電極界面上的電化學生物傳感.pdf

1、黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1),被世界衛生組織列為Ⅰ類致癌物的毒素,它的危害已經危及到了全世界人民的公共安全,世界各國也都已經在關注 AFB1的污染問題。各國都制訂了針對各國不同國情的規章制度,以限定 AFB1在食品及動物飼料中的含量。同時,各國的科研工作者也都在為研究更快,更簡易的AFB1檢測設備以及檢測方法。
　　本論文的主要工作包括:
　　1. AFB1單克隆抗體修飾金電極制備AFB1免疫傳感器

2、
　　制備了快速檢測黃曲霉毒素B1的黃曲霉毒素B1抗體@納米金修飾金電極電化學傳感器單元。實驗選用循環伏安法(CV)和示差脈沖伏安法(DPV)研究黃曲霉毒素B1在修飾電極上的電化學響應,確定了該傳感器測定黃曲霉毒素B1的最優實驗條件(黃曲霉毒素B1單克隆抗體的最適修飾條件為4℃、8 h,PBS緩沖溶液的最適pH值為7.4),建立了測定黃曲霉毒素B1的電化學方法,其線性方程為:i(μA)=0.02166 C+18.8682,線性相關

3、系數R=0.9997;線性檢測范圍為1.427~150 ng mL-1,對不同豬飼料樣品檢測的加標回收率在94.44~101.36％。
　　2.基于電化學ssDNA損傷傳感對飼料中黃曲霉毒素B1的檢測
　　構建了一種快速、簡便、價廉的檢測黃曲霉毒素 B1(AFB1)的新型電化學DNA生物傳感器,實現對AFB1的快速檢測。試驗中采用電化學方法為分析方法,對試驗條件進行優化,并據最優化條件建立了標準曲線、檢測樣品。試驗最終得出的

4、最優化條件為:ssDNA于4℃下在裸電極上自組裝14 h,ssDNA-Au電極與cDNA的雜交時間為2 h,然后得到dsDNA-Au電極,以60μM亞甲基藍(Methylene blue, MB)為電化學活性指示劑,pH=7.0,0.2 M磷酸鹽緩沖溶液(PBS)配制的鐵氰化鉀溶液為緩沖底液,不同濃度的AFB1對電極的損傷時間為9 min,不同濃度的AFB1對電極的損傷溫度為37℃。該方法對AFB1的線性檢測范圍為21.839~800

5、ng mL-1,加標回收實驗的回收率在98.34%~101.68%。建立的電化學DNA損傷方法可以實現對AFB1快速、簡便、準確的定量檢測。
　　3.基于電化學dsDNA損傷傳感對飼料中黃曲霉毒素B1的檢測
　　構建了一個以亞甲基藍為電活性指示劑的電化學DNA檢測系統。將巰基修飾的dsDNA固定在金電極上,通過探討dsDNA在金電極表面的自組裝、MB及黃曲霉毒素濃度對響應信號的影響等,討論了傳感體系的檢測限及特異性。將固定好

6、dsDNA的金電極與黃曲霉毒素B1的溶液進行反應,由于黃曲霉毒素B1與DNA的相互作用,通過與黃曲霉毒素B1反應前后電信號的變化,可以確定目標溶液中黃曲霉毒素B1的量。在對MB的濃度、反應底液的pH值以及溫浴的時間和溫度等優化后的條件下,黃曲霉毒素B1的濃度在12.458~500 ng mL-1范圍時,經AFB1損傷前后的峰電流差值與lg(CAFB1)之間的關系滿足線性關系,線性相關系數 R=0.9970,加標回收實驗的回收率在95.9