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文檔簡介
1、用尿酸酶法測定血清中尿酸水平可分為間接尿酸酶法和直接尿酸酶法,間接尿酸酶法中,用尿酸酶偶聯上醛脫氫酶和過氧化物酶的動力學方法效率高,缺點是成本高,干擾因素較多,使其很難在臨床上應用推廣。目前的直接尿酸酶法只有終點平衡法,受0.40 mmol/L以上血清黃嘌呤等少數物質干擾,對大多數其余血清成分有抗性,曾是IFCC推薦的參考方法。用過氧化物酶偶聯尿酸酶再加上不同的顯色劑稱為間接終點平衡法,則因為重復性好,操作簡便,節約成本等特點在臨床上得
2、到了廣泛地應用,但最大的干擾因素來自于血清中的黃嘌呤。
我們已克隆了苛求芽孢桿菌胞內尿酸酶基因并已申請其發明專利(專利受理號200910103741.1),此酶用于直接動力學法尿酸測定時可對1.50 mmol/L黃嘌呤有抗性。本課題的研究目的是考察此尿酸酶在間接終點平衡法應用中的最適條件,對其診斷性能進行詳細地評價,建立尿酸試劑盒的初步模型。
優化后的試劑最適條件如下:
R1兩份(PBS6.0) R2一份(
3、PH9.2硼砂) HRP2.7U/ml(1.8U/ml) uricase1.2U/ml(0.4U/ml)4-AAP0.45mmol/L(0.3mmol/L) Toos4.2mmol/L(1.4mmol/L) NaN30.05%NaN30.05%
按照NCCLS的相關要求,對自主研制的尿酸試劑的各個診斷性能進行了詳細地評價:檢測限LOD=LOB+1.65SD=14.4umol/L;線性范圍:0-1600umol/L線性方程:Y=
4、0.0003X-0.0012, R2=0.9971;可報告范圍:14.4-3510umol/L;批內精密度為2.2%和3.0%,批間精密度為4.0%和4.8%;試劑保存的穩定性可達半年以上,參考區間:男206-426umol/L,女145-336umol/L;膽紅素濃度≤320umol/L,抗壞血酸濃度≤0.4mmol/L,血紅蛋白濃度≤4g/L時,對尿酸測定結果沒有明顯干擾;與中生北控尿酸試劑進行方法學比較:直線方程y=0.9506X
5、-1.2647,R2=0.9956。
在抗黃嘌呤干擾方面:中生北控尿酸試劑盒、成都邁克尿酸試劑盒、新城生物尿酸試劑盒、自制尿酸試劑盒在黃嘌呤濃度為0-1.2mmol/L時測定結果都沒有明顯干擾。而真核尿酸試劑在黃嘌呤濃度>0.3mmol/L時,即對測定結果有明顯的負干擾。以上實驗證明實驗室自制原核表達的尿酸酶試劑比真核表達的尿酸酶在抗黃嘌呤方面有明顯的優勢,其它性能指標的評價也達到了市場同類產品的相同水平。為后續將此重組尿酸酶
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