構建新型電化學生物傳感器并應用于細菌相關靶標檢測.pdf

1、論文題目：構建塹型電絲堂生物佳盛墨羞應旦王細菌擔羞塑拯撿塑4答辯委員會主席：黃佳立麴握答辯委員會成員：渣菱趁盟宜旦黃連出重I嬰宜旦溫州醫科大學碩士學位論文構建新型電化學生物傳感器并應用于細菌相關靶標檢測摘要目的(1)利用四面體DNA納米結構電化學基因傳感器對多種細菌進行快速靈敏的通用及特異性檢測。(2)構造一種新的光學和電化學方法，檢測生物小分子ATP。方法(1)提取細菌RNA，使用具有特異性或通用性的引物對cDNA進行擴增，構造四面體

2、DNA電化學基因傳感器，利用特異性或通用探針對擴增產物進行檢測。(2)在葡萄糖氧化酶法葡萄糖檢測體系中，加入以三磷酸腺苷和葡萄糖為底物的己糖激酶與葡萄糖氧化酶競爭消耗葡萄糖，葡萄糖信號的變化間接反映了溶液中ATP的含量。通過光學法和電化學方法對ATP進行檢測。結果(1)基于16SrRNA的細菌檢測實驗：首先，我們以Ecoli為模型，對四面體DNA電化學基因傳感器的檢測靈敏度進行了考察，結果表明，對合成DNA的檢測限可以達到100aM，對

3、不對稱PCR產物的檢測限為10fM。隨后，我們對9種細菌特異性擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳表征，結果表明，9種引物都能對其對應菌種實現擴增，而且對部分細菌達到了1CFU的檢測水平；對9種細菌通用擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳表征，結果顯示，9種細菌均有明顯擴增產物。再者，我們考察了引物特異性，發現，在現有PCR條件下6種引物特異性不理想。最后，我們考察了四面體DNA電化學基因傳感器對除Ecoli外的其余8種細菌的合成DNA的檢測靈敏度