食品中新霉素獸藥殘留酶聯免疫檢測方法研究.pdf

1、本論文對獸藥新霉素的酶聯免疫分析方法進行了研究。采用碳化二亞胺法(EDC)將新霉素與匙孔血藍蛋白(KLH)連接制得免疫原免疫兔子,制備出高效價和高特異性的新霉素多克隆抗體。采用碳化二亞胺法(EDC)與辣根過氧化物酶連接制得酶標抗原,建立了一種高靈敏度直接競爭ELISA檢測方法,IC50為1.0±0.2μg/L,溶液中的最低檢測限(IC15)為0.1±0.01μg/L,低于以往關于新霉素直接競爭ELISA分析方法的報道,并對方法的精密度進

2、行了考察,板內變異和板間變異的變異系數均低于20％。由于新霉素在畜牧業生產中廣為使用,因此在動物源性食品中殘留較多,故將所建立的方法應用于所選取的牛奶、豬肉、魚肉、雞肉、雞蛋和豬腎六種樣品中新霉素殘留的快速檢測,詳細考查了不同樣品基質對ELISA方法的影響及其去除方法,新霉素的最低檢出限均低于最低殘留限量(500 μg/kg或μg/L),分別對新霉素在六種實際樣品中的添加回收率進行實驗,回收率平均可達到75％～105％,可滿足國標檢測方

3、法對檢測靈敏度的要求,也可滿足快速篩選方法的要求。
　　 因為新霉素無發色團,在紫外和熒光條件下無法被檢測到,故需采用衍生的方法。選擇鄰苯二甲醛和巰基乙醇對新霉素進行衍生,研究了衍生反應的試驗條件,建立了檢測動物源性樣品中新霉素殘留的高效液相色譜檢測方法,采用液相色譜法對建立的新霉素直接競爭酶聯免疫檢測方法的準確性進行了驗證。兩種方法檢測結果的一致性很高,線性相關系數R2值在0.9以上。
　　 進一步對新霉素抗體和酶標抗