用于乳腺蛋白標志基因檢測的DNA電化學生物傳感器的研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴重危害女性身心健康的常見惡性腫瘤，其發病率每年快速遞增，而乳腺癌的侵襲轉移是導致乳腺癌病人死亡的主要原因。乳腺癌侵襲轉移診斷的特異性標記物為乳腺蛋白標志基因，通過對其診斷可為臨床乳腺癌轉移早期監測、治療提供科學的研究基礎，具有十分重要的學術創新性和臨床應用前景。DNA電化學生物傳感器是當前生物基因檢測技術的前沿研究，具有快速、靈敏、準確、簡便經濟等特點，在分子生物學和生物工程醫學等領域有廣泛的應用前景。
　　 本論

2、文利用基于偶聯活化劑技術的共價鍵合法，將乳腺蛋白標志單鏈DNA序列探針固定到電極表面，再利用電化學交流阻抗檢測技術進行DNA雜交前后電信號的檢測，并對檢測的實驗條件進行了優化，構建了基于DNA電化學生物傳感器的乳腺蛋白基因檢測新方法。實驗結果表明，用十二烷基磺酸鈉(SDS)作為非特異性吸附去除劑，能夠有效的去除單或雙鏈DNA在電極表面的非特異性吸附。在SDS的最佳洗脫時間為3 min，探針固定最佳時間為30min，雜交最佳的溫度和時間分

3、別為37℃和20min的優化實驗條件下，利用電化學交流阻抗檢測技術測得乳腺蛋白標志基因在1.0x10-9～2.0x10-8mol/L的濃度范圍內與檢測響應信號呈良好的線性關系(r=0.9992)，檢測限為5×10-10(S/N=3)，從而實現對乳腺蛋白標志基因的準確靈敏測定，
　　 此外，該方法對臨床乳腺癌實際樣本進行了初步實驗，并與傳統檢測乳腺蛋白標志基因的PCR凝膠電泳方法進行對照試驗研究。從臨床實際陽性樣本中提取的mRNA