復合誘變選育富鉻酵母及其培養條件優化研究.pdf

1、鉻是生物體必需的微量元素，具有很多生物學功能。GTF(葡萄糖耐量因子)是一種能維持動物血液中葡萄糖水平正常的物質，鉻是保持GTF活性的必要成分。但是無機鉻的吸收率底、毒性大。酵母菌對微量元素具有很強的吸附作用，可以作為微量元素良好的載體，將無機鉻轉化成有機鉻，提高鉻在機體內吸收利用率，降低其毒副作用，且酵母本身含豐富的蛋白質和B族維生素，是一種良好的微生物蛋白飼料營養源。所以，獲得高產富鉻酵母的關鍵就在于擁有一株好菌株。本實驗就是經N+

2、注入并輔以紫外線復合誘變處理，篩選高產突變株，并確定制備富鉻酵母的最佳條件。 實驗以熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)1254為出發菌，低能離子束誘變參數是能量20Kev，劑量0～20×2.6×1014N+/cm2，結合鉻濃度剃度平板篩選法，得到耐鉻能力較強的菌株Y-6。結果顯示：生物量和鉻含量分別由原來的0.525ug/100mL、562ug/g提高到0.905ug/100mL、829ug/g。變異菌株Y-6經

3、傳5代培養，生產性能穩定。利用單因素試驗摸索出了Y-6最佳培養條件：最佳培養基為：1％酵母粉、1％蛋白陳、2％麥芽糖、蒸餾水配制，培養基含鉻量800ug/mL、初始pH5.0、10％接種量、培養溫度30℃、培養24h，制備富鉻酵母效果最佳，此項富鉻酵母制備技術為工業化生產奠定了基礎。N+注入可能是一種有效的富鉻酵母選育方法。 通過對N+注入酵母細胞的生物學效應研究發現：離子束對酵母細胞有直接刻蝕損傷作用，菌體成活率隨注入劑量的增

4、加呈先降、后升、再降的“馬鞍型”變化關系。SEM觀察發現，未經N+注入的細胞較為完整、飽滿且表面光滑，而經注入后的細胞表面粗糙，可見明顯的刻蝕損傷和破壁現象，并且注入劑量越大，傷痕也越深寬。在培養過程中，經平板單菌落和顯微鏡觀察，發現離子注入后的酵母菌落和細胞形態與原始菌比較，均有明顯的變化。 本實驗對富鉻酵母中有機和無機鉻進行測定，發現篩選菌株Y-6有機鉻含量達94.6％，而出發菌的有機鉻含量是85％。紫外光譜分析，高鉻酵母在