褪黑素及其受體激動劑對脂肪細胞胰島素抵抗相關因子影響的研究.pdf

1、目的：研究Mel及其受體激動劑Neu-P11對FFA誘導的3T3-L1脂肪細胞胰島素抵抗相關因子AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC、瘦素、脂聯素、脂聯素受體1的表達及葡萄糖攝取能力和甘油三酯含量的影響。
　　方法：實驗分為三個部分，第一部分是細胞的誘導分化，用經典的“雞尾酒”法即IBMX、地塞米松和胰島素三聯培養誘導3T3-L1成纖維細胞分化成脂肪細胞，并用油紅O染色鑒定脂肪細胞形態。第二部分是利用FFA誘導脂肪細胞的胰島

2、素抵抗，葡萄糖氧化酶法檢測細胞攝取葡萄糖的能力。第三部分是檢測Mel及其受體激動劑NEU-P11對FFA處理的3T3-L1脂肪細胞的葡萄糖攝取能力及其相關蛋白瘦素、脂聯素、脂聯素受體1、AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC表達的影響，并采用甘油三酯試劑盒檢測甘油三酯的表達情況。
　　結果：用“雞尾酒”法誘導3T3-L1成纖維細胞10～12天以后，90％分化為成熟的脂肪細胞，油紅O染色可見圓形、脂滴很多呈典型的“戒環樣”形態。

3、用棕櫚酸誘導脂肪細胞發生胰島素抵抗，結果顯示：300uM的棕櫚酸處理12小時后，細胞攝取葡萄糖的能力明顯降低，細胞內甘油三酯的含量增加，脂聯素及脂聯素受體1、瘦素、AMPK及磷酸化AMPK、ACC及磷酸化ACC的表達水平下降，Mel/Neu-P11于FFA處理結束前6小時加入一起孵育，結果顯示：細胞攝取葡萄糖的能力隨著胰島素濃度的增加而顯著增加，甘油三酯的含量則隨著Mel/Neu-P11的干預處理而降低，接近正常水平，同時我們還發現：脂

4、聯素及脂聯素受體1、AMPK及磷酸化 AMPK、ACC及磷酸化 ACC的表達水平隨著Mel/Neu-P11的干預處理呈現上調的趨勢，接近正常水平，瘦素在 Mel/Neu-P11干預處理6小時后變化不明顯，無統計學意義。
　　結論：1.Mel/Neu-P11可以增加棕櫚酸處理的脂肪細胞在胰島素刺激下的葡萄糖攝取能力；2. Mel/Neu-P11能夠上調棕櫚酸處理的脂肪細胞脂聯素及脂聯素受體1的表達，進一步激活AMPK，導致其下游蛋白