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文檔簡介
1、目的:研究Mel及其受體激動劑Neu-P11對FFA誘導的3T3-L1脂肪細胞胰島素抵抗相關因子AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC、瘦素、脂聯素、脂聯素受體1的表達及葡萄糖攝取能力和甘油三酯含量的影響。
方法:實驗分為三個部分,第一部分是細胞的誘導分化,用經典的“雞尾酒”法即IBMX、地塞米松和胰島素三聯培養誘導3T3-L1成纖維細胞分化成脂肪細胞,并用油紅O染色鑒定脂肪細胞形態。第二部分是利用FFA誘導脂肪細胞的胰島
2、素抵抗,葡萄糖氧化酶法檢測細胞攝取葡萄糖的能力。第三部分是檢測Mel及其受體激動劑NEU-P11對FFA處理的3T3-L1脂肪細胞的葡萄糖攝取能力及其相關蛋白瘦素、脂聯素、脂聯素受體1、AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC表達的影響,并采用甘油三酯試劑盒檢測甘油三酯的表達情況。
結果:用“雞尾酒”法誘導3T3-L1成纖維細胞10~12天以后,90%分化為成熟的脂肪細胞,油紅O染色可見圓形、脂滴很多呈典型的“戒環樣”形態。
3、用棕櫚酸誘導脂肪細胞發生胰島素抵抗,結果顯示:300uM的棕櫚酸處理12小時后,細胞攝取葡萄糖的能力明顯降低,細胞內甘油三酯的含量增加,脂聯素及脂聯素受體1、瘦素、AMPK及磷酸化AMPK、ACC及磷酸化ACC的表達水平下降,Mel/Neu-P11于FFA處理結束前6小時加入一起孵育,結果顯示:細胞攝取葡萄糖的能力隨著胰島素濃度的增加而顯著增加,甘油三酯的含量則隨著Mel/Neu-P11的干預處理而降低,接近正常水平,同時我們還發現:脂
4、聯素及脂聯素受體1、AMPK及磷酸化 AMPK、ACC及磷酸化 ACC的表達水平隨著Mel/Neu-P11的干預處理呈現上調的趨勢,接近正常水平,瘦素在 Mel/Neu-P11干預處理6小時后變化不明顯,無統計學意義。
結論:1.Mel/Neu-P11可以增加棕櫚酸處理的脂肪細胞在胰島素刺激下的葡萄糖攝取能力;2. Mel/Neu-P11能夠上調棕櫚酸處理的脂肪細胞脂聯素及脂聯素受體1的表達,進一步激活AMPK,導致其下游蛋白
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