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文檔簡介
1、近年來,由于有機污染物的大量出現以及人們環保意識的提高,各類有機污染毒物性質以及其對人體造成的危害越來越受到人們的關注。有機污染毒物的管理與有害廢棄物的處理是和人們息息相關的課題,為了更好的控制各種有害有機物,了解有害物質的生命周期及其與生物大分子之間的反應機理是極為重要的。此外小分子與生物大分子的相互作用研究,對發現新藥物和在基因水平上疾病的治療,尤其是藥物分子的作用機理也具有非常重要的意義,因此一直是人們關注和研究的課題之一。因此,
2、本文選定了一些典型的有機小分子,以近年來新發展起來的共振光散射(resonancelightscattering,RLS)技術為基本手段,研究了小分子與蛋白質、核酸之間的相互作用。 主要研究內容如下: 1.依思明藍與牛血清白蛋白相互作用 在pH3.78水溶液中,血清白蛋白可與染料探針依思明藍通過疏水作用結合并產生以367.4nm為特征峰的共振光散射(RLS)增強信號。在該特征波長下測定的增強共振光散射強度(
3、ΔIRLS)與血清白蛋白濃度在一定范圍內具有線性關系。據此建立了痕量血清蛋白的共振光散射分析法。當依思明藍的濃度為1.5×10-5mol/L時,牛血清白蛋白、人血清白蛋白以及IgG的檢測限分別可達2.34ng/mL、6.86ng/mL和10.9ng/mL?;诠舱窆馍⑸鋽祿癝catchard圖,獲得依思明藍與牛血清白蛋白和人血清白蛋白的結合常數(K)以及結合位點數(n)分別為2.90×105M-1,2.9和2.96×105M-1,0.
4、35。 2.陰離子表面活性劑與白蛋白與球蛋白相互作用的散射偏振研究 在酸性緩沖溶液中,十二烷基硫酸鈉(SDS)可以與人血清白蛋白(HSA)以及免疫球蛋白(IgG)作用并導致共振光散射(RLS)的明顯增強。本文通過建立偏振共振光散射(PolarizationResonanceLightScattering,PRLS)法,測得了污染物表面活性劑與蛋白質作用的差異,表明可利用共振光散射偏振度(Pψβ)的不同來對上述兩種相對
5、分子量相差較大的蛋白質(HSA66kDa;IgG150kDa)與SDS反應的體系進行區分,所獲結論與粒徑分析數據一致。 3.十二烷基硫酸鈉誘導人血清白蛋白聚集 在pH3.78水溶液中,隨著HSA的加入,出現粒徑變小并所測動態光散射(DynamicLightScattering,DLS)數值由不穩定向穩定過渡的現象,說明SDS能夠引起蛋白質的聚集。該結論與共振光散射方法所得結論一致。 4.鹽酸小檗堿與DNA作
6、用的特異性 基于分子吸收和熒光發射,測定發現鹽酸小檗堿(BBH)特別親和G堿基,隨著序列中G堿基數目增大,BBH與DNA的結合就越強。如果互補的雙鏈中不存在G堿基,BBH與該互補體的結合將不穩定,從而實現G堿基錯配測定。利用HyperchemProfessional軟件包計算了dCMP、dGMP、dAMP和dTMP中的電荷分布,并在此基礎了進一步探討了鹽酸小檗堿與寡聚核苷酸之間的作用機理,表明靜電作用和鍵長等引起的空間電子云密
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